Sterilizační ověření účinnosti autoklávů

Jedním z nejdůležitějších nástrojů v mikrobiologické laboratoři je sterilizátor, přičemž nejčastěji se používá autoklávový (vysokotlaký parní sterilizátor). Podle GB 4789.1-2016 by mělo být laboratorní zařízení pravidelně kontrolováno a/nebo kalibrováno (s inspekčními značkami), udržováno a obsluhováno, aby se zajistila správná výkonnost a provozní bezpečnost. Ale vaše autokláce prošla takové inspekce? A pokud chcete provést ověření, jak byste to měli udělat? Dnes shrneme klíčové metody pro ověření účinnosti sterilizace autoklávů.

Ověření účinnosti sterilizace autoklávu obecně zahrnuje metody, jako je chemický indikátor, maximální teploměr, teplotní trubice a biologický indikátor. Ačkoli tyto metody sdílejí podobné principy - hlavní potvrzení, zda sterilizátor dosáhne požadované teploty během sterilizace - si můžete vybrat jednu nebo více na základě specifických podmínek vaší laboratoře.

1. Metoda chemického indikátoru

Princip: Chemické ukazatele podléhají změně barvy nebo tvaru za specifických teplotních a časových podmínek. Tato změna se používá k určení, zda byly splněny parametry sterilizace.

Běžně používanou položkou v laboratořích je 3M indikátorová páska, která mění barvu po sterilizaci. Páska je vyrobena z termosenzitivních chemikálií, barevných vývojářů a barevných materiálů, vytištěných ve vzoru pruhu na lepicí pásky. Používá se přímo na vnější stranu sterilizačního balíčku s minimální délkou 5 cm. Lehce stiskněte pásku, abyste zajistili dobrou adhezi a těsnění. Po vystavení 121 ° C po dobu 20 minut nebo 130 ° C po dobu 4 minut by měly diagonální bílé pruhy na pásku zcela černě zčernat. Pokud je změna barvy nerovnoměrná nebo neúplná, není balíček považován za správně sterilizovaný.

2. metoda maximálního teploměru

Princip: Tato metoda používá rtuťový teploměr, který se po zahřátí nevrací na nižší teplotu, podobný tradičnímu lékařskému teploměru. Označuje maximální teplotu dosaženou během sterilizace.

Pro ověření umístěte teploměr rtuti do vodoplněné baňky Erlenmeyer. Během sterilizace umístěte baňku na horní a dolní části autoklávu. Po procesu zkontrolujte, zda čtení teploměru odpovídá požadované teplotě. Tato metoda může ověřit pouze teplotu a nemůže potvrdit, zda byl splněn požadavek na čas sterilizace, takže představuje minimální standard pro ověření autoklávu.

3. Metoda teplotní trubice

Princip: Tato metoda využívá určité chemikálie, které se roztaví a rekrystalizují při specifických teplotách, s výrazným krystalem vytváří po chlazení. Tyto chemikálie jsou utěsněny v malých skleněných zkumavkách a umístěny uvnitř autoklávu. Po sterilizaci je zkoumán tvar krystalu, aby se zjistilo, zda bylo dosaženo správné teploty.

Kyselina benzoová se běžně používá s bodem tání 121–123 ° C, což je v souladu se standardní sterilizační teplotou autoklávu. Pevná kyselina benzoová je utěsněna v malých skleněných zkumavkách a umístěna do autoklávu. Po sterilizaci je pozorován stav kyseliny benzoové, který potvrzuje, zda bylo dosaženo cílové teploty. Stejně jako metoda maximálního teploměru tento přístup ověřuje pouze teplotu, nikoli doba trvání sterilizace.

4. Metoda biologického indikátoru

Princip: Tato metoda používá nepatogenní spóry Geobacillus stearothermophilus jako indikátorových organismů k posouzení účinnosti tepelné sterilizace. Tyto spóry jsou vysoce tepelně rezistentní, s rezistencí podobnou rezistenci patogenních spojů Clostridium botulinum, což z nich činí vhodné ukazatele pro ověřování účinnosti sterilizace.

Biologické ukazatele jsou k dispozici ve třech formách: suspenze spór, spórové proužky a integrované trubice spór a médium. Ty jsou obvykle umístěny na pěti místech v sterilizační kontejneru: přední, střední a zadní část spodní vrstvy, jakož i středové body horních a středních vrstev. Po sterilizaci jsou indikátory inokulovány na bromocresol fialovou glukózovou peptonovou vodu a inkubovány při 55–60 ° C po dobu 2–7 dnů. Pokud médium zůstává jasné a nezměněno barvy, byly spóry zabito, což naznačuje dobrou sterilizaci. Pokud se médium stane žlutým a zakaleným, spóry přežily, což naznačuje špatný sterilizační výkon. Stejný proces validace sledují jak suspenze spór, tak proužky spór.

Komerční biologické indikátorové trubice se také běžně používají v laboratořích. Obsahují geobacillus stearothermophilus spóry a utěsněné skleněné ampule s růstovým médiem. Trubky jsou umístěny v celé sterilizační nádobě. Po autoklávosti je skleněný ampule rozdrcen, aby uvolnil médium, a trubice je inkubována při 56 ° C, vedle pozitivní kontroly. Pokud je sterilizace nedostatečná, přeživší spóry porostou a stane vývar žlutě. Pokud je sterilizace účinná, spóry jsou inaktivovány a vývar zůstává fialový.

Ověřovací frekvence

V současné době neexistuje žádný přísný národní standard, pokud jde o frekvenci ověřování účinnosti autoklávu. Očekává se, že laboratoře vytvoří své vlastní ověřovací plány a přísně k nim dodržují. S ohledem na snadné použití a spolehlivost výsledků doporučujeme používat indikátorovou pásku v kombinaci s biologickými indikátorovými zkumavkami, protože nabízejí jednoduchý provoz a komplexní ověření účinnosti sterilizace.

Poznámky k sterilizaci (není nutné pro některé importované plně automatické autoklávy)
Při použití vysokotlakého parního sterilizátoru je zásadní vyloučit veškerý studený vzduch uvnitř komory, když se uvolní pára. Teprve poté, co se odstraní studený vzduch, pokud bude výfukový ventil uzavřen. Pokud jakýkoli vzduch zůstane, může měřič tlaku naznačovat správný tlak, ale skutečná teplota uvnitř komory nedosáhne. Čím více vzduchu si udrží, tím větší je nesoulad mezi tlakem a teplotou, což potenciálně vede k neúplné sterilizaci. (To je často pozorováno během sterilizace fermentačních médií, kde vzduchové bubliny zůstávají v malých vodicích zkumavkách - důkladněji vyčerpávají studený vzduch.)